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Tween20在线播放_tween20是什么(2024年12月免费观看)

内容来源：兔耳朵在线影院所属栏目：导读更新日期：2024-12-01

Tween20

𐟧ꔂST缓冲液配置指南 𐟔씂ST缓冲液，用于免疫印迹等实验，由Tris缓冲液、氯化钠和Tween-20组成。 𐟓配方（1X浓度）： - 10X PBS缓冲液（pH 7.4）：含1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Tris。 - Tween-20：0.1%（v/v），即1L 1X PBS中加1mL Tween-20。 - 蒸馏水：至1L。 𐟔쥈𖥤‡步骤： 1️⃣ 取无菌容器，加入1L 10X PBS。 2️⃣ 用蒸馏水稀释至1X，并搅拌均匀。 3️⃣ 加入0.1% Tween-20，继续搅拌至均匀。 4️⃣ 过滤或离心缓冲液，去除颗粒。 5️⃣ 分装至无菌瓶，避免冻融，室温或4℃保存。 𐟒ᥰ贴士：制备好的TBST缓冲液应尽快使用，以确保最佳效果。

四种缓冲液配方，一文秒懂！ 𐟔 主要用途 𐟔 相同点与不同点 𐟔 应用小技巧 𐟌Ÿ 每1000ml配方： 𐟌🠔BS (Tris-Buffered Saline) 配方：6.05克 Tris base，85.0克氯化钠 (NaCl)，用HCl调整pH值至7.4-7.6 𐟌🠔BST (Tris-Buffered Saline with Tween-20) 配方：与TBS相同，加上1ml Tween-20 𐟌🠐BS (Phosphate-Buffered Saline) 配方：1.42克磷酸二氢钠 (NaH2PO4)，8.77克磷酸氢二钠 (Na2HPO4)，90.0克氯化钠 (NaCl)，用NaOH调整pH值至7.2-7.4 𐟌🠐BST (Phosphate-Buffered Saline with Tween-20) 配方：与PBS相同，加上1ml Tween-20 （增强型TBST缓冲液增加了新型抑菌剂和防腐剂）

𐟧ꐂST缓冲液配置全攻略✨ 𐟔 你是否正在寻找PBST缓冲液的配置方法？这种强大的洗涤缓冲液是免疫印迹实验等科研工作的得力助手！它融合了磷酸缓冲液（PBS）与氯化钠（NaCl），还添加了表面活性剂Tween-20，让实验结果更清晰。 𐟓 配方来啦（1X浓度）： - 10X PBS缓冲液（pH 7.4）：包含1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4, 18 mM KH2PO4，记得将10倍浓缩的PBS缓冲液稀释为1X哦！ - Tween-20：0.1%（体积/体积比例），就是在1L的1X PBS里加上1mL Tween-20。 - 蒸馏水：加到1L就搞定啦！ 𐟑颀𐟔젩…置步骤来啦： 1️⃣ 取个无菌容器，放入1L的10X PBS缓冲液。 2️⃣ 用蒸馏水把10X PBS稀释到1X，然后搅和搅和。 3️⃣ 撒点Tween-20进去，继续搅，直到均匀混合。 4️⃣ 用过滤或离心的方法，把做好的PBST缓冲液里的颗粒或杂质都去掉。 5️⃣ 最后，把缓冲液分装到小瓶子里，别让它反复冻融，放在室温下或者4摄氏度的阴凉地方就好啦！ 𐟎‰ 完成啦！现在你有了一瓶新鲜的PBST缓冲液，快去试试吧！

TBST和PBST的区别及配制方法 𐟧ꥮž验室小白的笔记 TBST和PBST的区别 TBST是TBS加Tween-20的缩写，而PBST则是PBS加Tween-20。两者的区别主要在于pH值和用途。 1. pH值变化：TBST的pH值随温度变化较大，而PBST容易有沉淀。如果需要反复使用抗体，建议使用TBST，因为它更稳定。洗液效果：两种洗液在洗脱蛋白时效果相似，都能提供稳定的pH环境，并有助于蛋白的洗脱。PBST是基于磷酸盐缓冲液，而TBST是基于Tris缓冲液。 TBS缓冲液 TBS缓冲液是生物学中常用的等渗缓冲盐溶液，主要用于免疫组化、原位杂交和酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹实验中非特异性结合的抗体等。它的配方（1X浓度）包括：1L的10X PBS缓冲液（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Tris, pH 7.4），加入0.1%的Tween-20（1 mL/L PBS），再补足至1L以获得最终浓度。配置步骤如下：首先，用蒸馏水稀释10X PBS至1X，再加入Tween-20，混合均匀后过滤或离心去杂质。最后，分装到无菌瓶中，存放在4℃的阴凉处，避免反复冻融。 PBS缓冲液 PBS缓冲液是指磷酸缓冲液（Phosphate Buffer Solution），渗透压近似于生理条件又有很强的pH缓冲能力，常用来洗细胞（不易涨裂）和作为细胞培养的基础液（pH缓冲）。它的配方为10X PBS（1.37 M NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4, 18 mM KH2PO4, pH 7.4），稀释至1X后加入0.1% Tween-20。与TBST相似，配制后过滤，分装并保存在适宜条件下。总结 TBST和PBST在实验室中都有广泛的应用，但它们在pH值和用途上有所不同。选择哪种洗液取决于你的具体实验需求。希望这些信息对你有所帮助！

BST不宜高压灭菌：防止吐温20起昙现象的有效方法 TBST（Tris-Buffered Saline with Tween 20）是一种常用的生物化学缓冲液，在Western blot等实验中用于洗涤膜上的非特异性结合物质。 TBST中含有Tween 20，这是一种非离子型表面活性剂，具有增溶和乳化的作用。然而，Tween 20在高压灭菌过程中可能会出现起昙现象，这是由于Tween 20中的疏水基团与水分子之间的氢键缔合在高温下被破坏，导致相分离。这种现象可能会影响TBST的性能和使用效果。为了防止Tween 20在TBST中起昙，可以采取以下有效方法： 1.过滤除菌：使用0.22微米的微孔滤膜对TBST进行过滤除菌。这种方法可以避免高温对Tween 20的影响，同时保证TBST的无菌状态。需要注意的是，Tween 20本身比较粘稠，高浓度时可能不好过滤。因此，在过滤前可以将TBST适当稀释，以降低Tween 20的浓度，提高过滤效率。 2.无菌操作：在配制和使用TBST时，严格遵守无菌操作规程，避免污染。使用无菌的容器和器具，确保整个操作过程的无菌性。 3.避免高温处理：尽可能避免对TBST进行高温处理，如高压灭菌等。如果确实需要对TBST进行灭菌处理，可以考虑使用其他非高温的灭菌方法，如紫外线灭菌或化学灭菌（但需注意化学灭菌剂对TBST成分的影响）。 4.质量控制：在配制TBST时，严格控制各成分的比例和浓度，确保TBST的质量和稳定性。定期对TBST进行质量检测，包括无菌检测、pH值检测等，以确保其符合使用要求。综上所述，为了防止Tween 20在TBST中起昙，建议采用过滤除菌的方法对TBST进行灭菌处理。同时，在配制和使用过程中严格遵守无菌操作规程，避免高温处理，并进行质量控制以确保TBST的质量和稳定性。这些方法可以有效防止Tween 20的起昙现象，保证TBST在生物化学实验中的正常使用效果。 #广州华韵生物科技有限公司#

亲和层析缓冲液全解析：从裂解到再生亲和层析是一种利用生物分子间的特异性相互作用来分离和纯化目标蛋白的技术。在这个过程中，缓冲液的选择和使用至关重要。以下是亲和层析中几种关键缓冲液的详细介绍： 1️⃣ 裂解缓冲液（Lysis Buffer）裂解缓冲液的主要功能是裂解细胞并释放细胞内的蛋白质，同时保持蛋白质的活性。其主要成分包括： ❶ Tris-HCl：用于调节溶液的pH值，保持蛋白质的稳定性。 ❷ NaCl：提供适当的盐浓度，有助于维持蛋白质的溶解性和稳定性。 ❸ 甘油：作为稳定剂，保护蛋白质免受变性。 ❹ Imidazole（咪唑）：一种竞争性抑制剂，用于初步去除与镍离子结合的非特异性蛋白。 ❺ 蛋白酶抑制剂（如PMSF）：防止蛋白质在裂解过程中被降解。 ❻ 溶菌酶（可选）：用于帮助裂解细菌细胞壁。 ❼ 表面活性剂（如NP-40、Tween 20）：帮助裂解细胞膜并释放蛋白质。 2️⃣ 洗涤缓冲液（Wash Buffer）洗涤缓冲液的主要作用是去除与固定相非特异性结合的杂质，同时保留特异性结合的目标蛋白。其组成通常与裂解缓冲液相似，但咪唑的浓度会适当增加，以增强对非特异性结合蛋白的去除效果。洗涤缓冲液的组成可能包括： ❶ Tris-HCl ❷ NaCl ❸ 甘油 ❹ 较高浓度的Imidazole（相对于裂解缓冲液） 3️⃣ 洗脱缓冲液（Elution Buffer）洗脱缓冲液的主要作用是将特异性结合在固定相上的目标蛋白洗脱下来。为了实现这一目标，洗脱缓冲液中通常包含较高浓度的咪唑，以竞争性地结合固定相上的镍离子，从而释放目标蛋白。洗脱缓冲液的组成可能包括： ❶ Tris-HCl ❷ NaCl ❸ 甘油 ❹ 高浓度的Imidazole（足以使目标蛋白从固定相上解离） 4️⃣ 再生缓冲液（Regeneration Buffer）再生缓冲液的主要作用是去除固定相上残留的蛋白质和其他杂质，恢复固定相的亲和能力，以便进行下一轮纯化。其组成通常包括能够去除镍离子和结合蛋白的强螯合剂，如EDTA，以及可能用于清洗和重新装载镍离子的溶液，如NiSO4溶液。然而，需要注意的是，在实际操作中，是否需要使用再生缓冲液以及其具体组成可能会根据所使用的亲和层析柱和实验需求而有所不同。在某些情况下，可能只需要使用简单的清洗步骤（如使用高浓度的NaCl溶液或去离子水）来恢复固定相的亲和能力。

实验结果图缺失条带？可能原因及解决方法亲爱的实验小伙伴们，最近有不少小伙伴在问实验结果图中没有条带的问题，别担心，这里有一些可能的原因和解决方法供大家参考： 𐟔 可能原因及建议： 1️⃣ 一抗和二抗加错了，或者不匹配请仔细检查一抗和二抗是否加对，确保选择的是针对一抗来源种属的二抗。 2️⃣ 一抗浓度过低或蛋白浓度不足尝试使用新鲜的抗体；调整抗体浓度，避免重复使用。 3️⃣ 发光液失效或不灵敏使用新鲜的灵敏型发光液。 4️⃣ 转膜不充分或时间过长用丽春红染膜确认条带是否转至膜上，适当调整转膜时间和电流。 5️⃣ 封闭过度或洗脱过度减少封闭时间；减少洗膜时间，降低去垢剂浓度，建议使用不高于0.1%的温和去垢剂Tween-20。 6️⃣ 蛋白降解提取蛋白样本时加入蛋白酶抑制剂；处理样本时在冰上操作。 𐟤” 如果有更多问题，欢迎大家一起探讨！

免疫沉淀实验常见问题及解决方案𐟧ꊥ…疫沉淀(IP)是一种用于纯化和富集目标蛋白的技术，在蛋白质组学研究中常用于识别蛋白质与蛋白质之间的相互作用。以下是免疫沉淀实验中常见的一些问题及其解决方案，希望对大家的实验有所帮助。 𐟌Ÿ背景高样本中有不溶蛋白残留：离心后应立即取出上清。洗涤不充分：优化洗涤缓冲液，通过加入去垢剂（如0.5-1% NP-40/Triton X-100/Tween-20）或增加盐离子浓度（如250mM NaCl/1-2mM DTT/ME），增加洗涤时间和次数来提高洗杂效率。非特异蛋白与磁珠结合：磁珠用BSA预封闭不充分，确保BSA新鲜，将磁珠和1% BSA孵育1小时，使用前PBS洗涤3-4次。抗体特异性不好：使用亲和纯化的抗体。抗体用量太多：尝试使用更少的抗体。裂解液中蛋白含量太高：减少样本用量。蛋白和抗体非特异结合：在免疫沉淀之前预先将磁珠和样本孵育，清理样本中可以和磁珠结合的成分，一些研究人员也使用同型对照来预清理裂解液。 𐟌Ÿ没有检测到目的蛋白洗脱样本中目的蛋白不表达或低水平表达：如果表达水平低，需要增加裂解液用量，但也可能导致非特异结合的增加，所以在免疫沉淀之前需要预先清除裂解液。抗体用量不够：检查抗体用量，提高使用量。目标蛋白没有从磁珠上洗脱：需要确保使用的洗脱缓冲液正确。抗体没有结合磁珠：确保使用的磁珠和抗体亚型匹配，磁珠正确保存，防止变质或干燥。裂解液中盐碱度太高：改用低盐碱度裂解液，一般可选NP-40, RIPA, western及IP细胞裂解液。 𐟌Ÿ加样顺序对靶蛋白得率的影响磁珠、抗体、抗原样本混合一起孵育：速度最快，但靶蛋白纯度和得率会很低。间接法：抗体和抗原样本先结合，再加入磁珠孵育，靶蛋白得率最高。直接法：磁珠先和抗体结合，再加入抗原孵育，对于表达丰度高的蛋白，两种方法差别不大，如果表达丰度低，要选择间接法获得更高的靶蛋白得率。希望这些小知识能帮助你更好地进行免疫沉淀实验！𐟧ꀀ

BCA蛋白浓度测定法：从原理到操作步骤 𐟌ˆ 原理： BCA蛋白浓度测定法是基于改良的Lowry法，利用二喹啉酸（bicinchoninic acid）作为反应剂。这个方法结合了双缩脲反应和显色反应：在碱性介质中，蛋白质将Cu2+还原成Cu1+，然后使用含有二喹啉甲酸（BCA）的独特试剂，通过比色法检测Cu1+，具有高灵敏度和高选择性。显色物质是由两分子的BCA和一分子的亚铜离子螯合形成的紫色物质。 𐟌Ÿ 特点：优点：灵敏度高：检测浓度下限达到10/ml，最小检测蛋白量达到0.2，待测样品体积为1-20。操作简便：在碱性溶液中BCA比Folin试剂稳定，只需一种试剂即可完成检测。兼容性强：测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween-20，60，80。线性范围广：在20-1000/ml浓度范围内有良好的线性关系。显色速度快：相同的样品孵育较短时间即可进行吸光度测定。缺点：容易受到能与铜离子反应的螯合剂，例如EDTA，巯基乙醇以及蛋白质内半胱氨酸等的影响。 𐟓 步骤（视试剂盒而定）： 1️⃣ 蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取20⵬ 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100⵬，使其终浓度为1.0 mg/ml。 2️⃣ 配制BSA标准测定溶液。 3️⃣ 工作液配制：将A液与B液按照50:1的比例混合，配成BCA工作液，并混匀。 4️⃣ 加样：将待测样本以适当体积加入并用PBS补足至20ul。 5️⃣ 孵育：向各孔中加入200⵬的工作液，混匀后37℃孵育30min，亦可室温放置2h。 6️⃣ 测定吸光度：测定562nm处的吸光度，记录数值，代入标曲计算浓度。 7️⃣ 绘制标准曲线计算样品浓度：新建一个Excel表格，将得到的标准品的吸光度按照下方表格排列，并按照试剂说明说输入相应标准品的浓度。选中标准品吸光度和浓度，点击“插入”，选择散点图。点击散点图的任意一点，右键选择添加趋势线；点击设置，趋势线选项选择“线性”，勾选“显示公式”和“显示R平方值”，即可得到标准曲线。计算样本浓度：代入公式直接计算即可，但要记得样本稀释倍数再回算回去。 𐟔 通过这些步骤，你可以准确地测定蛋白质的浓度，为后续的实验提供可靠的数据支持。

𐟔 解决His标签蛋白纯化杂带问题 𐟒ᠥ‘现His标签蛋白纯化跑胶有杂带？别担心，这里有解决方案！ 1️⃣ 如果His标签蛋白被部分降解，试试添加蛋白酶抑制剂（避免使用EDTA），保持低温操作，并缩短样品处理时间。 2️⃣ 在结合缓冲液中加入低浓度咪唑，如20-40mM，减少杂质与柱子的结合。 3️⃣ 若杂质与目的蛋白有相互作用，可在细胞破碎前加入去垢剂或还原剂，或在Wash buffer中提高去垢剂浓度，如2% TritonX-100或2% Tween 20，并添加甘油（20%以内）以破坏非特异性相互作用。同时，提高缓冲液的盐浓度至500 mM NaCl。 4️⃣ 使用线性咪唑浓度洗脱，缓冲液B设为500mM咪唑，浓度从0-100%逐步增加，洗脱10个柱体积。 5️⃣ 增加His标签长度至7-8个组氨酸，有助于提高纯化效率。 𐟎‰ 试试这些方法，让你的His标签蛋白纯化更加纯净！

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